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2005年10月16日 作者:ctnyzn [返回]
荧光诱导技术相关的专业术语解释

    在描述本技术时,下列术语将使用如下所述的定义。这些术语对本领域技术人员是众所周知的。

    “重组多核苷酸”是指基因组源,cDNA源,半合成源,或合成源的多核苷酸,依据其来源或操作,所述多核苷酸(1)不与所有或部分同其天然相连的多核苷酸相连,和/或(2)与除了同其天然连接之外的多核苷酸连接,或(3)自然界中不出现。

    “多核苷酸”是指任何长度的核苷酸的聚体形式,核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。该术语仅涉及分子的一级结构。因此,该术语包括双链和单链DNA以及双链和单链RNA。这也包括修饰(“修饰”表示,例如,通过甲基化,磷酸化和/或通过加帽而修饰)和未修饰形式的多核苷酸。“复制子”是指任何遗传元件,例如,在细胞内的行为象自动的多核苷酸复制单元一样;即能够在其自我控制下复制的质粒,染色体,病毒。

   本研究所用的“载体”是指其中连接着另一多核苷酸区段以使连接的区段复制和/或表达的复制子。载体可具有一个或多个多核苷酸或重组多核苷酸以及一个或多个控制序列,如本技术所用的载体总是包括以可操作连接有编码序列的启动子。

    “控制序列”是指多核苷酸序列,其必须对所连接的编码序列的表达和/或分泌施加影响。这类控制序列的性质的差异取决于宿主生物体。在原核生物中,这类控制序列一般包括启动子,核糖体结合位点和终止子。在真核生物中,这类控制序列一般包括启动子,终止子,以及在某些情形下还包括增强子。此外,在原核生物和真核生物中,一些控制序列将表达的多肽导向至细胞内的特定位置或多细胞生物体内的区域。术语“控制序列”最低目的包括所有对表达必要的组分,并且也可包括影响蛋白表达的其他多核苷酸系列。

    “启动子”是指表达的多核苷酸上游的多核苷酸序列。启动子序列对细胞机制发信号以表达其下游的多核苷酸。一些启动子象开关一样操作,并且仅向细胞发信号以在一定的条件下表达下游多核苷酸,诸如当生物体受到昆虫/病原体进攻,处于环境中一定温度之上,或在存在诸如IPTG的特殊化学物质的时候。

    “宿主细胞”,“微生物细胞”,“细胞”和其他表示微生物或培养成单细胞实体的高级真核细胞系的术语,可交互使用,是指可用作或已用作重组载体或其他转移多核苷酸的受体的细胞,并且包括已被转染的原始细胞的子代。由于意外或故意突变,单个亲本细胞在形态学或基因组或总DNA补体上可以与原始亲本细胞不必完全相同,这是可以理解的。与亲本有足够相似的亲本细胞的子代可表征为相关属性,诸如存在编码目的肽的核苷酸序列,包括在由此定义的子代中,并且由上述术语覆盖。

    “转化”或“转染"是指外源多核苷酸插入到微生物细胞,或诸如植物的多细胞生物体的细胞,不管插入所用的方法,例如,直接吸收,转导,f-接合,粒子轰击或细菌介导的基因转移。外源多核苷酸可作为非整合载体,例如质粒,得以维持,或者,可整合到宿主基因组中。

    “多肽”是指编码在多核苷酸内的序列的氨基酸产物,而不涉及特定长度的产物。因此,肽,寡肽和蛋白包括在多肽的定义范围内。该术语也不是指多肽的表达后修饰,例如,糖基化作用,乙酰基化作用,磷酸化作用,唾液酸化作用等。然而,多肽可被如此修饰。

   “转化多核苷酸”是指本领域已知并用于转化细胞的任何大量的多核苷酸结构。它们包括但不限于,质粒,噬菌粒,粘粒以及细菌人工染色体(BAC)。它们包括Ti质粒和能够转化植物细胞的其他结构,以及其他类型的细胞。 

   为了多核苷酸的表达需要启动子这样的控制序列。有许多已知的启动子。对给定转基因生物体而言,哪种启动子最好,将取决于表达所需的水平以及转化中的生物体类型。

    本领域技术人员会意识到,除了可用于本研究所述技术的各种载体外,还有多种控制序列可添加到多核苷酸序列上。在一些或所有植物中,生物发光有可能通过将荧光素酶和相应的荧光素导向至植物内的特定位置而得以增强。利用在蛋白N端或C端添加氨基酸所产生的控制序列而完成此项工作。这些添加的氨基酸利用植物内的机制以使与它们连接的蛋白导向至植物细胞的特定区域。例如,有些控制序列导向蛋白至叶绿体,而有些导致蛋白连接到细胞膜。利用这些控制序列将某些蛋白导向至特定位置的技术对本领域技术人员而言是众所周知的。

    本领域众所周知的是,控制序列也可用于调节多核苷酸序列的翻译和转录。这些控制序列可用于调节蛋白在其表达的生物体内的浓度。给任何给定的载体添加多种类型的这些控制序列是相对简单的程序。

    一些控制序列要求添加第二种调节序列。例如,只有在存在抑制剂蛋白时,一些控制序列抑制基因翻译。在此情形下,必须把编码抑制剂蛋白的序列添加到载体中。该抑制剂蛋白序列在其上游或下游又有自己的控制序列。为了正确发挥作用,对抑制剂蛋白序列而言,甚至有可能具有要求第二抑制剂蛋白序列的控制序列。此外,就象有要求抑制剂蛋白的控制序列一样,也有要求增加基因翻译的活化蛋白的控制序列。这些控制序列要求添加活化蛋白。

    还有在转录阶段调节编码序列表达的控制序列。这些序列抑制或促进核糖体对mRNA的活性。所有这些机制对本发明技术人员而言都是众所周知的。

    哪种控制序列,启动子和载体可用于特定植物将取决于转化的方法,载体导入的植物以及个人判断力。

    “荧光素酶”是指多种使相应的荧光素氧化从而导致生物发光的任何酶。本发明通常被吸引到某些水母中所发现的荧光素酶上来。术语荧光素酶也指萤火虫,细菌,鱼,乌贼和其他能够生物发光的生物体中发现的氧化酶。

    “荧光素”是指其他化合物,其中一些衍生自寡肽,易受到荧光素酶的氧化。在下述具体的实施方案中,腔肠素是优选的荧光素,然而,本领域技术人员会意识到,任何在植物细胞内可成功生产的荧光素都适用于本发明。除了水母外,不同的荧光素发现在水母,细菌,鱼,乌贼和其他生物体,并且所有在此引作参考。

    “绿色荧光蛋白”或“GFP”是指吸收由coelenterate荧光素酶发射的蓝光,并且借助荧光发射绿光。福斯特能量转移效应据认为可使蓝光高度有效地转化成绿光。通常GFP非共价地结合到荧光素酶/荧光素复合物。改变生物发光的波长的目的尚未知晓。本研究指出的前腔肠素多肽具有与GFP一样的序列,除了在其氨基酸序列中有单个改变以外。

    “选择序列”是指众多可放置在载体中以使成功转染的细胞区别于没有被转染的细胞的任何多核苷酸序列。这样一种选择序列的例子为编码启动子的多核苷酸序列,并且是一种赋予卡那霉素抗性的多核苷酸序列。本领域技术人员会意识到,有多种编码抗生素抗性的序列,它们常用于选择转染的细胞。本领域技术人员还会意识到,除了那些编码抗生素抗性的序列以外,还有其他选择序列。

    “不育操纵子”是指一种或多种添加到转染载体导致植物或其他生物体不能够繁殖的基因。本领域技术人员会意识到,成功的不育操纵子已由Monsanto公司开发,并正以其ROUNDUP READYTM大豆使用。本领域技术人员还会意识到,这仅仅是许多在植物或其他生物体内诱导不育的方法中的一种。

   

 

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