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2005年5月19日 作者:ctnyzn [返回]
愈伤组织和试管苗的培养

    愈伤组织的培养  一般来说,从接种外植体到出现愈伤组织,需要经过2周时间。2周之内就可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时,恒温箱的门应该关闭,不必见光,因为在无光条件下愈伤组织长得更快。2周以后,由于培养基中的营养成分已接近耗尽,必须更换培养基,进行继代培养。

愈伤组织的继代培养  进行继代培养所用的培养基,和培养愈伤组织所用的培养基相同。在严格的无菌条件下(接种箱内)将愈伤组织连同原来的外植体,一起移到新的培养基上。愈伤组织的继代培养,一代为20 d。如果延长培养时间,培养基中的营养物质会减少,外植体也会分泌一些有毒物质,造成自身中毒。20 d以后,可以根据愈伤组织的大小,决定是继续进行继代培养,还是进行试管苗培养。如果愈伤组织长到直径为1~15 cm时,就可以进行试管苗培养,否则还需要进行第二次继代培养。

在愈伤组织进行继代培养期间,可以将恒温箱的门打开,让愈伤组织见光。愈伤组织见光后,颜色可以转为绿色。

试管苗的培养  当愈伤组织长到一定大小后,可以更换培养基,进行试管苗的培养。试管苗的培养分为生芽培养和生根培养。要想培育出一株完整的试管幼苗,必须先进行生芽培养,然后进行生根培养。如果顺序颠倒,先诱导生根,就不好诱导生芽了。生芽大约需要4~6周的时间,而生根培养时,1周以后就可以见到幼根了。注意,试管苗应该进行见光培养。

下面列出继代培养和试管苗培养的培养基配方。①继代培养和生芽培养的培养基配方是:MS培养基+6BA(质量浓度为0.5~1.0 mg/L)+NAA(质量浓度为0.1~0.15 mg/L)。即在1 L MS培养基中加入5~10 mL6BA和1~1.5 mL的NAA母液。NAA配合6BA,可以促进不定芽的生长。②生根培养的培养基配方是:MS培养基+NAA(质量浓度为0.1~0.5 mg/L)。即在1 L MS培养基中加入1~5 mL的NAA母液。NAA起促进生根的作用。
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